This online course will focus on several key areas including data management of image data using OMERO open source data management solution, cloud-based sharing of image data using next-generation image file format, and image data repositories including Image Data Resource (IDR) and EMPIAR (Electron Microscopy Public Image Archive) as well as new developments within BioImage Archive.
France BioImaging (FBI) is organizing a remote training on Light-Sheet Fluorescence Microscopy (LSFM), which enable 3D imaging of biological samples with unprecedented spatio-temporal resolutions and low perturbing effects.
LSFM methods actually cover a large variety of implementations which allow imaging a wide range of sample types, from single cell to whole organs or organisms both live and fixed. These new imaging capabilities are revolutionizing the way we visualize our samples and address biological questions. However, imaging with a light-sheet microscope raises many questions about the choice of the set-up depending on the sample to image, the sample preparation and mounting protocols or the data management (storage, visualization, quantification). Thus, it can be difficult to find its way through the numerous microscope implementations, protocols and tools that have been extensively developed over the last 20 years. We therefore decided to review all those questions in a remote training.
Our goal is to help people who want to jump into the world of 3D imaging and are seeking the best solution for their samples and biological questions. In that perspective, we will provide a comprehensive picture including all the possibilities and challenges regarding LSFM.
The training will be divided in 3 parts:
- Theoretical courses on LSFM
- Practical demonstrations of several LSFM implementations available throughout the FBI infrastructure
- Live online question and answer session
For the two first parts, videos will be available on a Youtube FBI channel. The participants will have 3 weeks, from the 15th of February to the 5th of March 2021, to watch those videos and will be invited to ask questions or comment.
FBI experts will then answer all questions during a live interactive video chat on the third week of the training (5th of March where participants will have the opportunity to directly interact with the experts.
La formation portera sur les préparations des échantillons pour la microscopie (de la prise en charge de l'échantillon jusqu'à la coupe sur lame) et les méthodes de vérification de la qualité des échantillons préparés en vue de leur quantification par analyse d'image. Les caractéristiques de préparation de différents types d'échantillons seront présentées (tissus durs - os -, biopsie, organe entier...) et mises en pratique.
Cours et tables rondes (40 %)
- Préparation des coupes :
. détails des étapes de préparation des coupes histologiques paraffine et congelées
. présentation des diverses colorations, des protocoles, de cas d'écoles et d'erreurs typiques à éviter
- Immuno-marquages :
. préparations en immuno-histochimie sur coupe (DAB - Red chromogène...)
. éléments de traitement du signal et d'analyse d'image pour validation de la bonne préparation des échantillons
. aspects quantitatifs
. immunofluorescence - multiplexing
- Introduction à la préparation des gros échantillons : spécificités liées aux marquages et à la préparation des gros échantillons pour observation en microscopie
Travaux pratiques (60 %)
- Préparation des échantillons histologiques (mise en œuvre des protocoles présentés)
- Visualisation au microscope des échantillons préparés
- Acquisition et analyse des images dans les meilleures conditions (logiciels gratuits QuPath et ImageJ)
Possibilité de faire les TP, à des fins pédagogiques, sur des échantillons apportés par les stagiaires.
EQUIPEMENTS
Microtomes ; cryostat ; automate de coloration ; serial block face ; scanner de lame (fond et fluorescence) ; microscope champ large et confocal ; ordinateurs avec QuPath et ImageJ
Voir le site internet de la plateforme MicroPICell pour une description détaillée des équipements